Metodiche biomolecolari

L’elettroforesi in campo elettrico pulsato (Pulsed field gel electrophoresis o PFGE) è una tecnica di fingerprinting molecolare che permette la caratterizzazione di ceppi batterici. Questa metodica prevede la frammentazione enzimatica del genoma batterico propedeutica alla separazione dei frammenti generati mediante corsa elettroforetica (PFGE). Quest’ultima, a differenza delle elettroforesi convenzionali, presuppone la presenza di un campo elettrico pluridirezionale e pulsato, che consente la separazione dei frammenti di grandi dimensioni generati fornendo per ciascun ceppo batterico indagato un profilo genetico specifico (fingerprint) utile nelle investigazioni epidemiologiche sia a fini comparativi che di monitoraggio.

Multiple Loci VNTR Analysis (MLVA) è una tecnica di tipizzazione molecolare utilizzata per genotipizzare i ceppi batterici, basata sulla caratterizzazione dei polimorfismi legati alla presenza nel genoma batterico di sequenze ripetute in tandem denominate VNTR (variable number tandem repeat). Questo approccio fornisce marker utilizzabili negli studi epidemiologici finalizzati alla sorveglianza e alla caratterizzazione dei focolai di infezione epidemici.

Il sistema di array in fase fluida Bio-Plex impiega la tecnologia Luminex xMAP (Multiplex Analyte Profiling) che permette di caratterizzare e quantificare numerosi analiti nel medesimo campione biologico in maniera altamente sensibile e rapida. La tecnica prevede l’utilizzo di microsfere marcate con opportuni fluorofori sulla cui superficie vengono legate molecole marker che consentono la cattura dei target oggetto del saggio (anticorpi o antigeni nel caso in cui il target siano proteine, sequenze geniche se il target sono acidi nucleici). Il sistema Bio-Plex è molto versatile e viene impiegato per eseguire saggi immunologici, per studiare interazioni enzima-substrato o recettore-ligando e in studi genetico-molecolari.